一、PDOX模型構(gòu)建的核心優(yōu)勢(shì)

二、PDOX模型構(gòu)建流程

1. 患者腫瘤樣本獲取與處理

• 樣本來源：手術(shù)切除或活檢的新鮮腫瘤組織（避免壞死區(qū)域）。

• 預(yù)處理：

• 無菌PBS沖洗，去除血液和壞死組織。

• 切割成1–3 mm3小塊（保留腫瘤基質(zhì)成分）。

• 可選：短期培養(yǎng)（<24小時(shí)）于含生長(zhǎng)因子的培養(yǎng)基（如RPMI-1640 + 10% FBS）。

2. 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物選擇

• 免疫缺陷鼠：

• NSG（NOD-scid IL2Rγ?/?）：高度免疫缺陷，支持人源免疫細(xì)胞共移植。

• NOG（NOD/Shi-scid IL2Rγ?/?）：類似NSG，但更易獲得。

• 裸鼠（BALB/c nude）：T細(xì)胞缺陷，成本低，但移植效率較低。

• 動(dòng)物年齡：6–8周齡，雌性（減少雄性激素干擾）。

3. 原位移植手術(shù)

(1) 常見腫瘤類型的移植部位與方法

(2) 手術(shù)關(guān)鍵步驟

• 麻醉：異f烷吸入麻醉（2–3%誘導(dǎo)，1–2%維持）。

• 消毒：術(shù)區(qū)剃毛，碘伏+酒精消毒。

• 移植操作：

• 微型手術(shù)器械（如眼科剪、鑷）暴露靶器官。

• 植入腫瘤組織塊（1–2塊/動(dòng)物），避免血管損傷。

• 可輔以Matrigel（50%體積比）增強(qiáng)腫瘤定植。

• 術(shù)后護(hù)理：

• 保暖（37℃墊板），直至動(dòng)物蘇醒。

• 鎮(zhèn)痛（布托f諾，1 mg/kg，皮下注射，每日1次，持續(xù)3天）。

• 監(jiān)測(cè)體重（每周2次），傷口感染跡象。

4. 模型驗(yàn)證與監(jiān)測(cè)

• 成瘤率評(píng)估：

• 影像學(xué)：小動(dòng)物MRI/CT（肺癌、肝癌）或超聲（胰腺癌）每周1次，監(jiān)測(cè)腫瘤體積。

• 生物發(fā)光成像（BLI）：若使用熒光標(biāo)記的腫瘤細(xì)胞（如Luciferase），可實(shí)時(shí)定量腫瘤生長(zhǎng)。

• 病理驗(yàn)證：

• 移植后4–8周取材，H&E染色對(duì)比患者原發(fā)腫瘤的組織學(xué)特征。

• 免疫組化（IHC）檢測(cè)標(biāo)志物（如Ki-67、CD31評(píng)估增殖和血管生成）。

• 轉(zhuǎn)移檢測(cè)：

• 解剖肺、肝、淋巴結(jié)等常見轉(zhuǎn)移灶，進(jìn)行組織學(xué)分析。

三、PDOX模型的應(yīng)用場(chǎng)景

1. 個(gè)體化藥物篩選

• 對(duì)移植成功的PDOX模型分組，分別給予患者臨床用藥或?qū)嶒?yàn)性藥物（如靶向治療、免疫治療）。

• 評(píng)價(jià)指標(biāo)：腫瘤體積變化、生存期延長(zhǎng)、轉(zhuǎn)移抑制。

2. 腫瘤微環(huán)境研究

• 通過單細(xì)胞RNA測(cè)序（scRNA-seq）分析移植后腫瘤與基質(zhì)的相互作用。

• 評(píng)估人源免疫細(xì)胞（如PBMC）共移植后的免疫應(yīng)答。

3. 轉(zhuǎn)移機(jī)制探索

• 比較原位移植與皮下移植模型的轉(zhuǎn)移差異（如EMT標(biāo)志物表達(dá)）。

四、常見問題與解決方案