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燙傷感染模型構(gòu)建
更新時(shí)間：2025-06-23
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廠商性質(zhì)：其他
一、燙傷感染模型構(gòu)建流程
1. 材料準(zhǔn)備
動(dòng)物：BALB/c或C57BL/6小鼠（8-10周齡，雄性更佳）
病原體：銅綠假單胞菌PAO1或臨床分離株（OD600=0.6時(shí)約1×10^8 CFU/mL）
設(shè)備：
定制銅質(zhì)燙傷儀（直徑1cm，重量30g）或可控溫?zé)崴h(huán)系統(tǒng)
紅外測(cè)溫儀、無菌活檢穿孔器
耗材：無菌透明敷料（Tegaderm™）、苦味劑（防舔舐）
2. 燙傷創(chuàng)面制作
麻醉與備皮：
異fu烷麻醉，背部剃毛，脫毛膏處理殘留毛發(fā)。
碘伏+75%酒精消毒皮膚3次。
標(biāo)準(zhǔn)化燙傷：
干熱法：預(yù)熱的銅棒（100℃）接觸皮膚10秒（Ⅲ度燒傷，需病理確認(rèn)全層皮膚壞死）。
熱水法：90℃水浴中背部皮膚接觸8-10秒（需固定小鼠體位）。
創(chuàng)面確認(rèn)：
蒼白無出血、無痛覺反應(yīng)提示全層燒傷。
立即腹腔注射生理鹽水1mL（預(yù)防休克）。
3. 細(xì)菌接種與感染維持
菌液制備：
離心收集對(duì)數(shù)期細(xì)菌，PBS調(diào)整至5×10^6 CFU/50μL。
接種方法：
用移液器將50μL菌液均勻滴加至燙傷創(chuàng)面。
覆蓋透明敷料（模擬濕潤(rùn)環(huán)境，促進(jìn)生物膜形成）。
術(shù)后管理：
單籠飼養(yǎng)，每日更換敷料，觀察創(chuàng)面滲出/壞死。
二、燙傷感染模型構(gòu)建關(guān)鍵參數(shù)優(yōu)化
| 參數(shù) | 推薦范圍 | 調(diào)整依據(jù) |
|---|---|---|
| 燙傷溫度 | 90-100℃ | <80℃難以形成全層燒傷，>120℃導(dǎo)致碳化 |
| 接觸時(shí)間 | 8-12秒 | 與皮膚厚度相關(guān)（C57BL/6需更長(zhǎng)） |
| 細(xì)菌劑量 | 1×10^6-10^7 CFU/創(chuàng)面 | 過高導(dǎo)致全身感染，過低難以定植 |
| 感染周期 | 3-7天（急性） / 14天（慢性） | 銅綠假單胞菌生物膜3天后成熟 |
三、評(píng)估方法
1. 創(chuàng)面感染嚴(yán)重度評(píng)分
| 指標(biāo) | 評(píng)分標(biāo)準(zhǔn) |
|---|---|
| 紅腫 | 0=無，1=邊緣紅腫，2=擴(kuò)展至周圍組織 |
| 化膿 | 0=無，1=少量滲出，2=大量膿性分泌物 |
| 壞死 | 0=無，1=部分焦痂發(fā)黑，2=全創(chuàng)面壞死 |
2. 定量檢測(cè)
細(xì)菌載量：
剪取創(chuàng)面組織（含周圍5mm正常組織）。
勻漿后梯度稀釋，接種LB平板計(jì)數(shù)CFU/g組織。
組織病理：
HE染色：中性粒細(xì)胞浸潤(rùn)、組織壞死深度。
Gram染色：觀察細(xì)菌分布。
生物膜檢測(cè)：
掃描電鏡或共聚焦顯微鏡（SYTO9/PI染色）。
3. 全身影響監(jiān)測(cè)
體重下降（>20%需人道終點(diǎn)）。
血液CFU計(jì)數(shù)（判斷是否發(fā)生敗血癥）。
四、注意事項(xiàng)
燙傷均一性控制：
使用固定壓力燙傷儀（如50g/cm2壓力）。
同一實(shí)驗(yàn)員操作以減少變異性。
感染劑量驗(yàn)證：
預(yù)實(shí)驗(yàn)檢測(cè)不同劑量下72h創(chuàng)面CFU（理想范圍1×10^5-10^6 CFU/g）。
鎮(zhèn)痛管理：
術(shù)后布tuo啡諾（1mg/kg SC q12h）減輕疼痛。
糖尿病模型適配：
db/db小鼠燙傷后感染率更高，但需延長(zhǎng)愈合觀察期。
五、模型優(yōu)化策略
混合感染模型：
聯(lián)合接種金黃色葡tao球菌（1×10^5 CFU）和銅綠假單胞菌（1×10^6 CFU）模擬臨床復(fù)雜感染。
免疫抑制處理：
環(huán)lin酰胺（150mg/kg IP）預(yù)處理增強(qiáng)感染易感性。
生物膜強(qiáng)化：
延遲抗生素治療至接種后48h，促進(jìn)生物膜形成。
